获得准确的蛋白质印迹结果始于高效的蛋白质提取。传统的RIPA裂解液（含SDS）或NP-40裂解液等方法需要补充超声处理来提取大分子蛋白质，这存在蛋白质断裂的风险。此外，手动添加蛋白酶/磷酸酶抑制剂会增加工作流程复杂性和耗时。IntactProtein™细胞-组织裂解试剂盒采用基于去污剂的配方，旨在实现从小型到大型分子的完整蛋白质，同时不损害其结构完整性，从而彻底改变了蛋白质制备方式。
为什么要替换RIPA缓冲液Western Blot实验方案？虽然RIPA缓冲液Western Blot工作流程很常见，但它们面临着局限性：
• 不使用超声处理时，大分子量蛋白质（>150 kDa）回收率低。
• 物理破碎可能导致蛋白质变性。
• 添加抑制耗时。
我们的细胞裂解试剂盒消除了这些障碍。其优化的组织裂解缓冲液配方确保在15分钟内从贴壁/悬浮和组织中近乎完全地提取蛋白质——无需超声处理或抑制剂。
产品特色
• 全尺寸蛋白质回收：提取大型蛋白质（如激酶、受体）而不发生降解，性能优于标准的RIPA缓冲液印迹制备。
• PTM保存：维持关键的翻译后修饰（磷酸化、泛素化），以进行可靠的信号传导分析。
• 精简的工作流程：预混试剂A和B简化了使用过程——只需添加、混合并离心。是高通量实验室的理想选择。
• 广泛的兼容性：对哺乳动物细胞、冷冻组织以及富含脂质的膜等具有挑战性的样本均有效。
产品应用
1. 用于蛋白质印迹、免疫沉淀、共免疫沉淀和磷酸化蛋白研究。
2. 可用于从培养细胞、异种移植瘤或活检组织中提取蛋白。
3. 可替代 SDS-PAGE 和质谱分析流程中的 RIPA 裂解缓冲液。
产品组分
1. 试剂A：80 μl。
2. 试剂B：50 ml。。
存储条件
试剂A在-20°C；试剂B在室温。
案例
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图1. IntactProtein™裂解试剂盒在提取大分子蛋白方面表现出优异的性能。(A) 使用IntactProtein™裂解剂盒或RIPA缓冲液裂解HeLa细胞。用抗mTOR抗体对总裂解液（50 µg）进行免疫印迹。(B 使用该试剂盒裂解HT1080细胞，处理指定时间，并用抗SMRT抗体进行免疫印迹。注意，超声处理SMRT破碎成更小的肽段。 |
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图2. IntactProtein™裂解试剂盒能有效提取组织和细胞中的蛋白质。(A) 使用IntactProtein™裂解试剂盒裂HeLa细胞和老鼠脑组织（一式两份）。用抗mTOR抗体对总裂解物（50 µg）进行免疫印迹。() 对(A)中的相同裂解物用抗GAPDH抗体进行免疫印迹。请注意，IntactProtein™裂解试剂盒适用于从和组织中提取具有广泛分子量范围的蛋白质。 |
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图3. IntactProtein™裂解试剂盒能有效保留蛋白质的翻译后修饰。(A-B) HeLa细胞在用IntactProtein™解试剂盒提取蛋白质前，先进行16小时的血清饥饿处理，并用胰岛素（150 nM）刺激5分钟。总裂液（50 µg）分别使用抗磷酸化mTOR（Ser2448）(A)和抗mTOR (B)抗体进行免疫迹分析。(C)使用RlPA缓冲液或IntactProtein™裂解试剂盒裂解HeLa细胞。细胞裂解液使用抗O-Glcc（糖基化）抗体进行免疫印迹分析。 |
Publications
1. PPARγ Acetylation inAdipocytes Exacerbates BAT Whitening and Worsens Age-AssociatedMetabolic Dysfunction.
Publication: Cell
2. Salidroside reducesneuropathology in Alzheimer's disease models by targeting NRF2/SIRT3pathway.
Publication: Cell Biosci
3. Ventromedial hypothalamic OGT drives adipose tissue lipolysis and curbs obesity.
Publication: Advanced Science
4. O-GlcNAcylation is a gatekeeper of porcine myogenesis.
Publication: J Anim Sci
5. PPARγAcetylation Orchestrates Adipose Plasticity and Metabolic Rhythms.
Publication: AdvSci (Weinh)
Customer Testimonials
"I was always having trouble dealing with extraction of large-sized proteins such as mTOR (MW 289) from cultured cells. My problem was that without sonication, the extraction efficiency of large proteins was low; with sonication, the large-sized proteins were fragmented into smaller-sized peptides. This dilemma was finally solved by using IntactProtein™ Cell-Tissue Lysis Kit. With this kit, I obtained excellent results without losing phosphorylation signals. Moreover, this kit was easy to use by simply mixing reagent A and B and lysing the cells for 15 min on ice."
"We have tested your IntactProtein™ Cell-Tissue Lysis Kit in liver, adipose tissue, and cultured cells. It worked really well! Extracting proteins from fat is always a headache. Your buffer gave us high protein yields and sharp protein bands. We’d like to switch to your buffer"
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